巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），其中兩對(duì)PCR引物用于擴(kuò)增一個(gè)完整的片段。第一對(duì)引物的擴(kuò)增片段與普通PCR相似。第二對(duì)引物稱為套式引物（因?yàn)樗鼈冊(cè)诘谝淮蜳CR擴(kuò)增中），并與第一次PCR產(chǎn)

巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），其中兩對(duì)PCR引物用于擴(kuò)增一個(gè)完整的片段。第一對(duì)引物的擴(kuò)增片段與普通PCR相似。第二對(duì)引物稱為套式引物（因?yàn)樗鼈冊(cè)诘谝淮蜳CR擴(kuò)增中），并與第一次PCR產(chǎn)物結(jié)合，使第二次PCR擴(kuò)增比第一次短。巢式PCR的優(yōu)點(diǎn)是，如果在第一次擴(kuò)增中產(chǎn)生了錯(cuò)誤的片段，那么在第二次擴(kuò)增中對(duì)錯(cuò)誤片段進(jìn)行引物配對(duì)和擴(kuò)增的概率很低。因此，巢式PCR擴(kuò)增具有很強(qiáng)的特異性。

巢式PCR中的引物怎么設(shè)計(jì)？

巢式PCR一般有兩對(duì)引物，一對(duì)外引物和一對(duì)內(nèi)引物。為方便起見，一般建議內(nèi)引物直接根據(jù)靶序列設(shè)計(jì)引物（與普通PCR引物設(shè)計(jì)方法相同），外引物根據(jù)靶序列兩端的序列設(shè)計(jì)引物，即上下游來(lái)回移動(dòng)一些堿基來(lái)設(shè)計(jì)引物。內(nèi)外引物的設(shè)計(jì)應(yīng)包含重疊區(qū)，一般為10bp。如果手頭只有目標(biāo)序列，而且目標(biāo)序列前后沒有序列信息，可以用普通引物作為外引物，然后從序列內(nèi)部設(shè)計(jì)一對(duì)內(nèi)引物。原理與以前相同，也應(yīng)該包含10個(gè)左右的堿基重疊區(qū)。這時(shí)，因?yàn)槟愕膬?nèi)引物PCR產(chǎn)物會(huì)少堿基序列，你可以設(shè)計(jì)第三對(duì)引物，這對(duì)引物是外引物和內(nèi)引物的剪接序列，然后PCR，缺失的堿基會(huì)被人為添加。