剛果紅可以將纖維素染色成紅色絡(luò)合物，對纖維二糖和葡萄糖沒有影響。它可以用來鑒別纖維素分解菌或纖維素分解菌。剛果紅在培養(yǎng)基中能與纖維素形成紅色絡(luò)合物。纖維素酶分解纖維素時(shí)，不能形成剛果紅與纖維素的絡(luò)合物

剛果紅可以將纖維素染色成紅色絡(luò)合物，對纖維二糖和葡萄糖沒有影響。它可以用來鑒別纖維素分解菌或纖維素分解菌。剛果紅在培養(yǎng)基中能與纖維素形成紅色絡(luò)合物。纖維素酶分解纖維素時(shí)，不能形成剛果紅與纖維素的絡(luò)合物，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)一個(gè)以纖維素分解菌為中心的透明圓環(huán)。纖維素分解菌可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選。

剛果紅染色法的原理？

常用的剛果紅染色方法有兩種：首先培養(yǎng)微生物，然后加入剛果紅顯色反應(yīng)，用1mg/ml的Cr（剛果紅，下同）溶液覆蓋培養(yǎng)基，10-15min后，倒出Cr溶液，加入1mol/L的NaCl溶液，15min后，在產(chǎn)纖維素酶的菌落周圍會出現(xiàn)一個(gè)透明的圓圈。（添加氯化鈉的原因：剛果紅是一種與培養(yǎng)基結(jié)合的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌能產(chǎn)生纖維素酶，纖維素酶能將多糖底物分解成低聚糖。這樣剛果紅就不能被束縛，氯化鈉可以洗去束縛不牢的剛果紅，留下大小不同的透明圓圈。大透明圈對纖維素的分解能力強(qiáng)。）方法2：在倒盤時(shí)加入剛果紅，制備質(zhì)量濃度為10mg/MI的鉻溶液。滅菌后，以200 mi的速率制備CR溶液。向培養(yǎng)基中加入1mI。按0:1:1的比例加入鉻溶液，攪拌后倒入平板。當(dāng)細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長時(shí)，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍會有明顯的透明圈。

什么是剛果紅染色法？

剛果紅（CR）可與多糖（如纖維素）形成紅色絡(luò)合物，但不與纖維素水解產(chǎn)生的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生反應(yīng)；剛果紅與培養(yǎng)基中的纖維素發(fā)生反應(yīng)，使整個(gè)培養(yǎng)基呈紅色，而不是與細(xì)胞中的纖維素發(fā)生反應(yīng)。細(xì)菌產(chǎn)生的纖維素酶在體外分泌，將菌落周圍培養(yǎng)基中的纖維素分解，使菌落周圍培養(yǎng)基的紅色消失，從而形成一個(gè)明亮的圓環(huán)。

剛果紅染色，為什么出現(xiàn)透明圈？

剛果紅可以將纖維素染色成紅色絡(luò)合物，但對纖維二糖和葡萄糖沒有影響。它可以用來鑒別纖維素分解菌或纖維素分解菌。

剛果紅染色是檢驗(yàn)什么？

常用的剛果紅染色方法有兩種，一種是培養(yǎng)微生物，然后加入剛果紅進(jìn)行顯色反應(yīng)，另一種是在倒盤時(shí)加入剛果紅。

方法1：菌落形成培養(yǎng)基覆蓋1mg/MI。10-15min后，除去CR溶液，加入的物質(zhì)濃度為1mol/I，15min后倒出NaCl溶液，纖維素酶產(chǎn)生菌周圍會出現(xiàn)一個(gè)透明的圓圈。

方法2：制備濃度為10 mg/MI。滅菌后，每200mi使用一次鉻溶液。向培養(yǎng)基中加入1mI。按0:1:1的比例加入鉻溶液，攪拌后倒入平板。當(dāng)細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長時(shí)，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍會有明顯的透明圈。

剛果紅兩種染色方法的比較

剛果紅用于纖維素分解菌的篩選已有20多年的歷史，教材中給出了兩種方法。方法一是傳統(tǒng)方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落混合；其優(yōu)點(diǎn)是顯色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法2的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，不存在混合菌落的問題。缺點(diǎn)是纖維素粉、瓊脂和馬鈴薯汁中含有淀粉，會使產(chǎn)淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。然而，產(chǎn)淀粉酶微生物產(chǎn)生的透明圈是模糊的，這與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈是有區(qū)別的，因?yàn)槔w維素是培養(yǎng)基中的主要成分。方法2的另一個(gè)缺點(diǎn)是有些微生物具有降解色素的能力，它們在長期培養(yǎng)過程中會降解剛果紅，形成一個(gè)清晰透明的圓環(huán)，很難與纖維素分解菌區(qū)分開來。

兩種剛果紅染色法有什么優(yōu)缺點(diǎn)？

第一種方法是培養(yǎng)后染色，時(shí)間只有10~15分鐘，不會影響結(jié)果。

第二種方法是在菌落培養(yǎng)前加入剛果紅染料。如果不滅菌，培養(yǎng)過程中會有其他雜菌生長，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。